酶標儀已經(jīng)逐漸成為了實驗室里的常規(guī)儀器,酶標儀一般分為普通酶標儀和多功能酶標儀,普通酶標儀的功能基本相當(dāng)于一個分光光度計,主要用于吸收光(OD值)檢測,我們一般用普通酶標儀進行蛋白/核酸定量、Elisa、MTT等常規(guī)實驗。而多功能酶標儀在此基礎(chǔ)上還可以進行發(fā)光檢測和熒光檢測,能夠直觀反映出目標分子在細胞內(nèi)的活性。
在選購酶標儀的時候,我們會首先面臨一個選擇,濾光片還是光柵?酶標儀主要分為濾光片型和光柵型,分別以兩種不同方式生成特定波長的激發(fā)光,一種是通過濾光片,一種是通過單色器(包括光柵和棱鏡)。對于我們使用者來說,這兩種酶標儀究竟有何區(qū)別呢?
濾光片透光度高,光路簡單,能夠較大程度減少光線的損失,因此濾光片型酶標儀一般要比光柵型酶標儀靈敏。此外,濾光片能夠?qū)崿F(xiàn)快速的波長轉(zhuǎn)換,很適合離子通道比率分析以及雙信號快速動力學(xué)分析等。濾光片的配置決定了酶標儀所能使用的波長,我們更改實驗波長就是在切換濾光片。濾光片型酶標儀一般要比光柵型便宜一些,如果我們需要的波長比較固定,對靈敏度又有較高要求,那么濾光片型酶標儀無疑是好選擇。若是日后想要應(yīng)用其他波長,還需另外購買濾光片,要是需添置的波長多就不大合算了。所以在我們出手之前一定要先想好未來可能進行的各項研究,謀定而后動。
目前市面上的光柵型酶標儀其實比濾光片型更為普遍,這是因為光柵可以靈活設(shè)置波長,就算臨時開展新研究也不用專門去買濾光片。而且如果我們要用未知染料進行檢測,或是需要自定義波長和光譜掃描,就只能選光柵型酶標儀。此外,光柵在近紫外區(qū)的檢測效率也更高(如色氨酸熒光檢測)??偟膩碚f,如果實驗室應(yīng)用很多需要多種波長,那么選擇靈活方便的光柵型酶標儀準沒錯。若是應(yīng)用比較單一但對靈敏度要求高,物美價廉的濾光片型酶標儀就相當(dāng)貼心。此外,還有BioTek公司的Hybrid Technology系統(tǒng),該系統(tǒng)將濾光片和單色器組合起來,想用濾光片時選濾光片,想用光柵時選光柵,就是這么簡單。
不僅如此,不論我們買什么,適合自己的才是好的,選擇酶標儀時也是如此。酶標儀性能指標包括測定波長范圍、濾光片配置、檢測速度、吸光度范圍、線性范圍、分辨率、準確度、精密度等。
對于一般生命科學(xué)實驗室來說,酶標儀主要可用于基因表達、信號傳導(dǎo)、ELISA、蛋白和核酸定量、細胞活性分析和免疫分析。如果要進行細胞學(xué)實驗,酶標儀一般要能夠底部讀取、微孔板掃描、并支持孵育和搖晃。而要做高通量篩選的實驗室,就需要考慮到檢測速度和靈敏度。高通量篩選可能涉及到特殊篩選溶液、更低的檢測限以及大量微孔板。在選擇酶標儀時除了要關(guān)注可靠性、靈敏度和一致性以外,能否對微孔板所有孔進行同時檢測也是不可忽視的考量因素。